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免疫組化抗原修復注意事項

2015-05-13 瀏覽次數:1917

經甲醛固定的部分組織細胞,因固定過程中可能會形成醛鍵或羧甲基而封閉部分抗原決定簇,使免疫組化標記敏感性明顯降低,因此在染色前,有些抗原需進行修復或暴露。

 

抗原修復方法可分為化學方法和物理方法。化學方法是以酶消化方法,常用胰蛋白酶胃蛋白酶,配制濃度與消化時間要適度。常用的物理方法有單純加熱、微波處理和高壓加熱。在選用這三種方法時,浸泡切片的緩沖液的離子強度和pH、加熱的溫度和時間均影響著抗原修復效果。

 

1、pH的應用范圍及選擇

抗原修復液的pH非常重要,有效的抗原修復pH要比修復液的化學成分更重要,同樣的修復液隨著pH的升高染色的強度逐漸增強,但*pH范圍為6.0-10.0。目前大家*的的抗原修復液是pH6.0的檸檬酸鹽緩沖液和pH8.0的EDTA緩沖液。作為通用修復液堿性pH的修復液要比酸性的有效,而對固定很長時間舊的存檔組織,酸性pH的修復液則優于堿性的修復液。

 

2、抗原修復液必須遵循自然降溫規律,否則效果不好或達不到抗原修復的目的

抗原修復持續時間過后,取出放于室溫中讓其慢慢地降溫,不能為了爭取時間,強行用冰塊或冷水使其降溫。這是因為當高溫中的抗原蛋白分子鏈脫離了其他的束縛或聯結,要有一個自然環境讓其自然放松下來,隨著溫度的降低,它們會慢慢地恢復原來的形態和構型。

 

3、抗原修復時應選擇*溫度

70-90℃的溫度對未經固定的蛋白質可發生變性,但經福爾馬林固定的蛋白質,溫度必須達到92℃以上方能使其變性。研究結果顯示,溫度為92-98℃是合適的,95℃效果。

 

4、盡量使用足量的抗原修復液

應用于抗原修復的液體,一定要充足,防止切片干涸。應用大量的抗原修復液時,由于它的量較大,可延緩液體的沸騰時間,增加切片受微波輻射的量,對抗原修復將達到*。

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